·糖尿病基础研究·

沙建平 薛耀明 陈炫 罗祥蓉 关美萍 曾展军 何飞英 王玲 魏民

基金项目：“十五”863生物领域高技术首批重点课题(2001AA215161)

作者单位：510515广州，南方医科大学附属南方医院内分泌科(沙建平、薛耀明、罗祥蓉、关美萍、曾展军、何飞英、王玲、魏民);暨南大学第一附属医院临床实验中心(陈炫)

通讯作者：薛耀明，E-mail:Bright.x@medmail.com.cn

【摘要】 目的 将在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP),用于INGAP的生理功能研究和动物实验。 方法 通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和EcoRⅠ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒INGAP/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因INGAP,甲醇诱导rhINGAP的表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定生物学活性。 结果 成功构建了重组表达质粒INGAP/pPIC9K, 筛选得到3个阳性转化子，表达产物具有良好的抗原活性。 结论 实现了rhINGAP在毕赤酵母中的高效分泌性表达及纯化。