·基础论著·

作者：陈海燕 李娟 张强 吴英 周红文 张克勤 郭锡熔 陈家伟 韩晓 张辰宇 陈琪 杨涛

基金项目：国家自然科学基金青年基金资助项目(30400219)

作者单位：210029南京医科大学第一附属医院内分泌科(陈海燕、李娟、张强、吴英、周红文、张克勤、陈家伟、杨涛);南京医科大学基础医学院(郭锡熔、韩晓、陈琪);南京大学生命科学学院(张辰宇);第一作者现在郑州第一人民医院内分泌科工作

通讯作者：杨涛，E-mail:yangt@njmu.edu.cn

【摘要】目的 应用INGAP多肽在体外建立新的分步诱导分化体系诱导胰岛新生。方法 分离纯化SD大鼠的胰腺导管干细胞。并体外扩增培养，取2～6代细胞进行分步诱导分化，于分化末期添加INGAP多肽，待诱导结束后收获新生类胰岛样细胞团(ILCs)分别行免疫荧光和RT-PCR检测，并通过葡萄糖刺激的胰岛素释放试验(GSIS)评价ILCs的胰岛素分泌能力。结果(1)分离纯化的胰腺导管干细胞经过四步诱导后最终可形成立体结构的ILCs，其insulin和glucagon染色均为阳性，RT-PCR检测该ILCs也有insulin和glucagon基因的表达。(2)GSIS结果：新生ILCs和新分离胰岛的高糖组胰岛素释放量均显著高于低糖组(P<0.01);新生ILCs的胰岛素刺激指数接近新分离胰岛(P>0.01)。结论 通过建立新的包含INGAP多肽的体外分步诱导分化体系，能够获得具有立体结构和一定胰岛素分泌能力的立体ILCs，为获取胰岛移植所需的β细胞提供了更有效的方法。